Los métodos convencionalmente usados se pueden clasificar de acuerdo al agente y/o proceso esterilizante en:
Ø Calor húmedo
Ø Calor seco
Ø Químicos
Ø Radiaciones
Ø Filtración
Ø CALOR HÚMEDO:
ØVapor saturado a presión superior a la normal
Bajo estas condiciones se logran temperaturas superiores al punto de ebullición del agua. Generalmente se emplea una presión de vapor de una atmósfera por encima de la presión normal, lo que corresponden a una temperatura de 121°C. El poder de penetración del vapor a esta temperatura es muy alto, lo suficiente como para destruir en 15 a 20 minutos, dependiendo del volumen del material a esterilizar, esporas que sobrevivirían a la ebullición durante horas. Por éste método se pueden esterilizar soluciones, medios de cultivo, material de vidrio, ropa, en general materiales que soporten la temperatura de esterilización. Existen varios tipos de autoclaves siendo el más comúnmente usado el de Chamberland. El equipo consiste en una caldera metálica (en general de cobre) rodeada por una camisa externa también metálica de forma cilíndrica, en cuya parte inferior, y por debajo de la caldera, se encuentra la fuente de calor. La caldera lleva en su interior un doble fondo desmontable y perforado sobre el cual se coloca el material a esterilizar. La parte superior cierra con una tapa de bronce que ajusta perfectamente mediante una junta de goma de siliconas y una serie de tornillos de bronce. La tapa presenta tres elementos que comunican con el interior de la caldera: el manómetro, que generalmente indica presión sobre la atmosférica, la válvula de seguridad, y la llave de salida de vapor o espita.
Ø INSTRUCCIONES PARA SU USO.
Cuando el autoclave se usa con vapor saturado a presión superior a la normal se deben seguir los siguientes pasos:
1. Colocar agua en la caldera procurando que su nivel no alcance a los objetos que se colocarán en su interior. AL material a esterilizar sólo le debe llegar el vapor que es el agente esterilizante.
2. Cargar el material a esterilizar debidamente acondicionado.
3. Cerrar el autoclave ajustando los tornillos de su tapa en posición cruzada, a fin de asegurar un cierre parejo y hermético. De ésta manera se prolonga la vida útil de la junta de siliconas, cuyo espesor debe ser homogéneo en todo el recorrido.
4. Abrir la salida de vapor y encender la fuente de calor.
5. Asegurarse el correcto estado de la válvula de seguridad.
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6. La salida de vapor debe estar
abierta para desalojar el aire interior, hasta que salga un chorro continúo y
abundante de vapor. La temperatura de trabajo, 121°C se alcanzará a la presión
de una atmósfera sobre la normal solo si dentro del autoclave existe vapor en
equilibrio con el agua, por lo cual es necesario asegurar la eliminación de
aire del interior de la caldera. Si no se logra la adecuada eliminación del
aire, la presencia de aire mezclado con vapor de agua resultara en una
temperatura inferior a 121°C. De lo dicho se deduce que el manómetro podrá
marcar una atmósfera de sobrepresión, pero si no se ha efectuado una correcta
eliminación de aire la temperatura será inferior a la esperada.
7. Purgar el aparato: se cierra y se abre tres veces la llave de salida de vapor, para eliminar los restos de aire.
8. Cerrar. Calentar hasta que el manómetro indique la presión deseada. Regular la fuente de calor para mantener la presión constante. A partir de ese momento comenzar a contar el tiempo de esterilización.
El tiempo de exposición varía con el volumen de los líquidos contenidos en distintos recipientes:
7. Purgar el aparato: se cierra y se abre tres veces la llave de salida de vapor, para eliminar los restos de aire.
8. Cerrar. Calentar hasta que el manómetro indique la presión deseada. Regular la fuente de calor para mantener la presión constante. A partir de ese momento comenzar a contar el tiempo de esterilización.
El tiempo de exposición varía con el volumen de los líquidos contenidos en distintos recipientes:
RECIPIENTE
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VOLUMEN
(ml)
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TIEMPO DE EXPOSICIÓN
(min)
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Vaso de precipitado
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20
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12-14
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Matraz erlenmeyer
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50
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12-14
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Matraz erlenmeyer
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200
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12-15
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Matraz erlenmeyer
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1000
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20-25
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Matraz erlenmeyer
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2000
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30-35
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Los tiempos son válidos para un tratamiento a 121C
Una vez transcurrido el tiempo de tratamiento, apagar la fuente de calor y esperar que el manómetro marque cero. Recién en ese momento se puede abrir la llave de salida de vapor y luego la tapa del autoclave para retirar el material.
Ø Vapor fluente o vapor a presión normal
El autoclave puede utilizarse empleando vapor saturado a 100 C (presión atmosférica). En este caso se trabaja con la llave de salida de vapor abierta. Cuando sale un chorro de vapor continuo y abundante, se purga el aparato y se deja abierta la llave. A partir de ese momento se cuenta el tiempo de exposición.
Este proceso conocido como tyndalización utiliza la acción intermitente del vapor o la esterilización fraccionada. Se utiliza para la esterilización de materiales que no soportan temperaturas superiores a 100 °C. El proceso consiste en un calentamiento a 100°C durante 30 minutos en el que mueren las bacterias en estado vegetativo. Luego se deja a temperatura ambiente durante una noche y se repite la operación, se deja nuevamente a temperatura ambiente y se procede aun tercer y último calentamiento.
El método se basa en que en el primer calentamiento se logra destruir las formas vegetativas y se estimula la sensibilización de las formas esporuladas por acción de la temperatura y el medio líquido. En los posteriores calentamientos las formas esporuladas , ahora sensibilizadas, serán destruidas.
Este método puede utilizarse para la esterilización de leche, gelatina nutritiva, solución de azúcares con concentraciones superiores al 10 %, etc.
Una vez transcurrido el tiempo de tratamiento, apagar la fuente de calor y esperar que el manómetro marque cero. Recién en ese momento se puede abrir la llave de salida de vapor y luego la tapa del autoclave para retirar el material.
Ø Vapor fluente o vapor a presión normal
El autoclave puede utilizarse empleando vapor saturado a 100 C (presión atmosférica). En este caso se trabaja con la llave de salida de vapor abierta. Cuando sale un chorro de vapor continuo y abundante, se purga el aparato y se deja abierta la llave. A partir de ese momento se cuenta el tiempo de exposición.
Este proceso conocido como tyndalización utiliza la acción intermitente del vapor o la esterilización fraccionada. Se utiliza para la esterilización de materiales que no soportan temperaturas superiores a 100 °C. El proceso consiste en un calentamiento a 100°C durante 30 minutos en el que mueren las bacterias en estado vegetativo. Luego se deja a temperatura ambiente durante una noche y se repite la operación, se deja nuevamente a temperatura ambiente y se procede aun tercer y último calentamiento.
El método se basa en que en el primer calentamiento se logra destruir las formas vegetativas y se estimula la sensibilización de las formas esporuladas por acción de la temperatura y el medio líquido. En los posteriores calentamientos las formas esporuladas , ahora sensibilizadas, serán destruidas.
Este método puede utilizarse para la esterilización de leche, gelatina nutritiva, solución de azúcares con concentraciones superiores al 10 %, etc.
Bibliografía :
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