La preparación de medios de cultivo es sencilla pero incluye la
manipulación de múltiples sustancias. Esta preparación puede simplificarse
mediante el uso de:
Ø Packs
listos para usar, disponibles para medios frecuentemente utilizados.
Habitualmente constan de medio base, sin reguladores.
Ø Elaboración
de soluciones stock mas concentradas, agrupando los compuestos en varias
soluciones stock, por ejemplo:
ü Stock 1: Macros (x10)
ü Stock 2: Sales de Calcio (x 10)
ü Stock 3: Micronutrientes (x 100)
ü Stock 4: Solución de hierro
ü Stock 5: Vitaminas (x 100)
ü Stock 6: Reguladores (cada uno individualmente)(x 200)
Estas soluciones stock se conservan en nevera
(stock 1, 2, 3 y 4) o congelador (stock 5 y 6), según los compuestos que
contengan, durante meses. Algunas soluciones deben conservarse en oscuridad.
Ø Algunos
aspectos relevantes al preparar el medio o las soluciones stock:
ü La cantidad de un compuesto a añadir, en peso, es función
de su grado de hidratación. Lo relevante es mantener la molaridad del
nutriente; a igual peso del compuesto, cuanto mayor grado de hidratación menor
molaridad del nutriente.
ü La concentración de una solución stock está limitada por
la solubilidad de sus compuestos y por las interrelaciones entre ellos. La
disolución de los compuestos no debe dar lugar a reacciones entre ellos que
causen algún tipo de precipitación o que disminuyan su capacidad de
incorporación al explanto.
ü Algunos compuestos, por ejemplo muchos reguladores de
crecimiento, son poco hidrosolubles. Para preparar sus soluciones stock se
disuelven en una pequeña cantidad de soluciones ácidas o básicas (OHNa 1N, HCl
1N), solventes orgánicos (ej. DMSO), o etanol, teniendo siempre presente el
potencial efecto (toxicidad, efecto sobre el pH, etc.) de dichos solventes.
ü Los compuestos termolábiles deben ser incorporados
mediante filtración al medio ya autoclavado y a temperaturas cercas a la
temperatura ambiente pare evitar su degradación.
Componentes de soluciones madres o stock que en conjunto con otros elemento ( sacarosa, phytagel y hormonas de crecimiento) conforman un medio de cultivo MS.
Ejemplo De Los Cálculos De Una Solución Stock.
Preparar 200 ml de solución de Fosfatos, Boratos y Molibdatos a una concentración de 100x.
- Fosfato Monopotásico. KH2PO4
La cantidad utilizada en g/L de este componente es 0.170, esta se multiplica por la concentración que es 100x da como resultado 17 g / L. Después se realizan cálculos mediante una regla de tres para determinar cuantos gramos utilizaran para un volumen de 200 mL, se lleva acabo el siguiente procedimiento:
17 g 1000 mL
X 200 mL
(200 mL)(17 g) 3400 g/mL
= = 3.4 g
1000 mL 1000 mL
- Ácido Bórico. H3BO3
6.2 g 1000 mL
X 200 mL
(200 mL)(6.2 g) 1200 g/mL
= = 1.24 g
1000 mL 1000 mL
- Molibdato De Sodio Dihidratado. Na2MoO4.2H2O
0.025 g 1000 mL
X 200 mL
(200 mL)(0.025 g) 5 g/mL
= = 0.005 g
1000 mL 1000 mL
Después de que se tienen los cálculos, en el laboratorio, estos se pesan en la balanza analítica , se disuelven de uno en uno en agua destilada en un matraz de Erlenmeyer a un volumen de 100 mL, después se afora en una probeta graduada a un volumen de 200 mL, se vierte en una botella color ámbar y se guarda en refrigeración.
Bibliografía:
Solución stock/solución madre esl.proz.com…… portugués al español.. Quimica/ciencias/ ing.quim. 8:00 pm 25/02/12
hola mi pregunta es, si se tiene una solucion stock de Tris a 0.5M a un pH de 8.0, y a partir de esta quiero preparar una solucion a una concentracion menor por ejemplo a 150mM y un pH 8.0, se mantiene el pH??? o se lo tengo que ajustar otra ves??
ResponderEliminarNo se
EliminarNoc
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ResponderEliminaren que momento se debe de emplear una solución madre o stock??
ResponderEliminarBuen artículo.
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