Materiales inertes
Se usan como soporte: agar, agarosa, otros polisacáridos, lana de vidrio, papel de filtro, arena.
Ø El agar es un polisacárido natural no ramificado y de alto peso molecular (3.000 a 160.000), extraído de algas rojas, Rhodofíceas, principalmente del género Gelidium. Está formado por galactosidos que forman la Agarosa, y de un polisacárido sulfatado, la Agaropectina. Además, contiene muy pequeñas cantidades de cationes como impurezas (Na, K, Ca, Mg, etc.). Su composición varía ligeramente en función de la especie de que se extrae, su procedencia, época de cosecha, madurez del alga, etc. Los procesos de obtención y purificación para producir los distintos tipos de agar afectan principalmente a su contenido en impurezas.
Gelificantes:
Ø El
gelificante suele ser un sólido que al añadirse a un medio de cultivo se
disuelve por calentamiento fuerte (cercano a los 100 ºC) y hace que el medio
adquiera la consistencia de gel al enfriarse a temperaturas menores. Uno de los
mejores agentes gelificantes de que se dispone para realizar cultivos in
vitro de tejidos
vegetales es el agar, también conocido como agar-agar. Los gelificantes deben
cumplir con una serie de requisitos: no ser asimilado por el explanto, lo que
haría que al consumirse el medio retornase a su estadio líquido, no interferir
en la absorción de los nutrientes del medio de cultivo, y permanecer estable
durante el tiempo de cultivo.
La
principal característica que hace del agar un gelificante es su total
disolución en agua al ser calentado a 85-100 ºC, y su gelificación alrededor de
los 35 ºC. Es termoreversible, es decir, se puede volver a disolver y a
gelificar repetidas veces mediante variaciones en la temperatura, y es
autoclavable. Su gelificación depende del pH del medio de cultivo, siendo
óptima para pH 5.4-5.7. Los medios de cultivo para tejidos vegetales suelen
ajustarse a pH = 5.7 antes de añadir el agar, por lo que melifican bien; tras
la gelificación el agar absorbe una cantidad de agua de hasta 200-300 veces su
peso, y forma un gel muy translúcido. La preparación de los medios de cultivo
para vegetales incluye generalmente un aporte de agar del 0.8%.
Ø Entre los
compuestos alternativos al agar para utilizarse como gelificantes en el cultivo in
vitro de tejidos
vegetales tenemos:
ü Alginatos.
Excelentes para cultivo de células en suspensión y de protoplastos.
ü Agarosa.
Es uno de los polímeros del agar, obteniéndose a partir de él. Se utiliza más
en electroforesis de proteínas o ácidos nucleicos que en cultivo in
vitro.
ü Fitagel.
Conocido también con el nombre gelrita, marca registrada de Merck; es de amplio
uso.
ü Ficoll. Es
un derivado de polisacáridos que produce medios de cultivo de tipo coloidal.
Encuentra una aplicación importante en el cultivo de anteras.
Ø El fitagel
es un polisacárido aniónico obtenido por fermentación bacteriana. El gel que
forma se caracteriza principalmente por:
ü Gran
transparencia, que facilita el seguimiento del cultivo.
ü El medio
nutritivo se gelifica con un aporte de fitagel de tan sólo el 0.2%
ü Precisa de
cationes divalentes para su gelificación, principalmente Mg o el Ca.
ü Se
disuelve y gelifica en respuestas a cambios de temperaturas, como el agar, si
bien no es termoreversible.
ü Los
explantos cultivados en medios con fitalgel absorben los nutrientes con mucha
facilidad, lo que permite un crecimiento mas rápido, sin embargo la velocidad
de absorción puede ser excesiva, no pudiendo incorporarse a sus estructuras y
compuestos sino que quedarían en solución dentro del explante, causando el
problema conocido típicamente como hiperhidricidad, frecuente en cultivos de
tipo leñoso.
ü •Su coste
es mucho menor
Bibliografía:
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