5.1. TÉCNICAS BASADAS EN PCR y/o ELECTROFORESIS
La hibridación de ácidos nucleicos
Es un proceso de unión de dos hebras complementarias de ácidos nucleicos pero cuyo origen es distinto. Una de ellas será el ácido nucleico diana y la otra será la sonda empleada para localizar ese ácido nucleico diana.
¿Qué es una sonda?
Una sonda es un fragmento monocatenario de DNA o RNA marcado con una molécula reporter, y que se emplea para el reconocimiento específico de una molécula determinada de ácido nucleico diana de cadena sencilla, en un proceso de hibridación.
Existen tres tipos de sonda de ácidos nucleicos:
- Fragmentos de DNA
- Fragmentos de RNA
- Oligonucleótidos sintéticos u oligosondas.
¿Qué son las moléculas reporter?
Son moléculas químicas unidas a la sonda y que van a permitir la detección de esta tras un proceso de hibridación. Existen moléculas reporter de muchos tipos: radiactivas (32P, 35S), de afinidad (Biotina, Digoxigenina...), enzimáticas (Fosfatasa, Peroxidasa ...) y quimioluminiscentes (ésteres de acridina).
¿Qué factores afectan a la sensibilidad y especificidad de la reacción de hibridación?
- Concentración del ácido nucleico diana
- Complementariedad sonda-ácido nucleico diana
- Concentración de la sonda.
- Longitud de la sonda
- Actividad específica de la molécula reporter.
- Condiciones de hibridación (pH, fuerza iónica, temperatura de hibridación, ...)
- Tm
- Acceso al ácido nucleico diana.
Bibliografía:
Apuntes de clases.
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