ESTERILIZACION
Los métodos utilizados corrientemente en los laboratorios microbiológicos son:
Calor al rojo (flameado).
Calor seco (aire caliente).
Vapor a presión (esterilización al autoclave).
Vapor fluente (tyndallización).
Filtración.
La incineración es también un método de esterilización, pero se aplica fuera del laboratorio para la eliminación final de los desechos producidos en él y se considera por separado.
CALOR AL ROJO
Los instrumentos tales como las asas y alambres de siembra y varillas secas se esterilizan calentándolas en la llama de un mechero bunsen hasta que se ponen al rojo. Los microincineradores se recomiendan para esterilizar asas de inoculación contaminadas con material muy infeccioso (espulos tuberculosos) para evitar el riesgo de chisporrotear partículas contaminadas sobre las zonas de alrededor.
CALOR SECO
Se aplica en un horno calentado eléctricamente que se controla mediante termostatos y que está provisto de un gran ventilador circulante que asegura la uniformidad de la temperatura en todas las partes del contenido. Los equipos modernos disponen de controles electrónicos que pueden llevar la temperatura al nivel requerido, mantenerla en ese punto durante un tiempo establecido previamente y desconectar seguidamente la corriente. En algunos modelos se incorpora una cerradura solenoide para impedir que la estufa sea abierta antes de que se complete el ciclo. Este dispositivo salvaguarda y protege al personal de quemaduras accidentales.
El material que puede esterilizarse por este método incluye placas de petri, matraces y pipetas de vidrio y objetos de metal. Pueden adquiriese de diversos proveedores cajas y cilindros metálicos que almacenan convenientemente el material de vidrio durante la esterilización y lo conservan estéril hasta su utilización.
CONTROL DE LOS ESTERILIZADORES DE AIRE CALIENTE
Los ensayos para los hornos de funcionamiento eléctrico provistos de ventilador se describen en la Norma Británica 34212.
El equipo de esterilización por aire caliente, debe calibrarse con termopares cuando el aparato se instala y comprobarse con termopares posteriormente cuando se considere necesario.
El control de rutina ordinario puede efectuarse sencillamente con la ayuda de tubos de Browne. Los tubos de Browne de Tipo 3 (punto verde) se utilizan para estufas provistas de ventilador.
VAPOR A PRESION
Se realiza Mediante la esterilización en autoclave. Las bacterias se matan más fácilmente por el calor húmedo (vapor saturado) que por el calor seco. El vapor mata las bacterias por desnaturalización de sus proteínas. Una condición de seguridad convenida para la esterilización es utilizar vapor a 121ºC durante 15 minutos. Esta temperatura es adecuada para medios de cultivo, soluciones acuosas, tratamiento de cultivos y muestras desechadas, etc.
El aire tiene una influencia importante en la eficacia de la esterilización al vapor de agua, porque su presencia modifica la relación presión/temperatura. Por ejemplo: la temperatura del vapor saturado a 1,054 kg/cm es 121ºC, siempre que se haya extraído todo el aire de la vasija, Si sólo se ha eliminado la mitad del aire, la temperatura de la mezcla aire-vapor que resulta es de solamente 112ºC a la misma presión. Además, la existencia de bolsas de aire impedirá la penetración del vapor.
Debe eliminarse primero todo el aire que rodea y penetra en la carga a antes de que pueda comenzar la esterilización por vapor.
OLLA A PRESION
Se utilizan todavía en muchas partes del mundo. El tipo más común es un aparato para agua hirviendo a presión. Tiene una cámara vertical de metal provista de una tapa metálica fuerte que se aprieta y cierra herméticamente mediante un aro de goma. Se disponen en la tapa una espita para la salida del aire y del vapor, un indicador de presión y una válvula de seguridad. El agua del fondo del autoclave se calienta mediante mecheros de gas exteriores, un calentador eléctrico de inmersión o un serpentín de vapor.
AUTOCLAVES CON ELIMINACION DEL AIRE POR DESPLAZAMIENTO DE LA GRAVEDAD
Estos autoclaves están por lo general dispuestos horizontalmente y son de forma rectangular, permitiendo que la cámara se cargue más fácilmente. Puede utilizarse un sistema de bandejas y carretilla.
La camisa que rodea al autoclave está compuesta de una pared externa que encierra un espacio estrecho alrededor de la cámara, que se llena con vapor a presión para mantener la pared de la cámara templada. El vapor penetra en la camisa desde la fuente principal que se halla a alta presión, a través de una válvula que reduce la presión hasta el nivel de funcionamiento. La presión de funcionamiento se mide en un indicador de presión independiente fijado a la camisa. Esta camisa tiene un drenaje independiente para eliminar el aire y la condensación.
El vapor penetra en la cámara de la misma fuente que suministra el vapor a la camisa. Se introduce de forma tal que es desviado hacia arriba y llena la cámara desde la parte superior hacia la inferior, impulsando así al aire y al condensado a fluir en el fondo de la cámara por el desplazamiento de la gravedad. El desagüe está provisto de filtros para impedir que se obture por residuos. El desagüe lleva generalmente un termómetro para registrar la temperatura del vapor que fluye. La temperatura registrada por el termómetro del desagüe es generalmente inferior a la de la cámara. La diferencia debe determinarse mediante ensayos con termopares. También cuenta con una válvula sensible al vapor.
TYNDALLIZACION
Este proceso, designado así después de que el científico Tyndall utilizara un vaporizador de Koch (o de Arnold), que es una caja metálica en el fondo de la cual el agua hierve mediante un mechero de gas, una resistencia eléctrica o un serpentín de vapor. El material que va a tratarse permanece en una bandeja perforada, inmediatamente por encima del nivel del agua. La tapa es cónica, de manera que el agua de condensación resbala por los laterales en vez de gotear sobre el contenido. Un pequeño orificio en la parte superior de la tapa permite que salgan el aire y el vapor. Se utiliza este método para esterilizar medios de cultivo que puede alterarse por exposición a temperaturas más elevadas, por ejemplo medios que contienen carbohidratos fácilmente hidrolizables o gelatina. Estos medios se vaporizan durante 30-45 minutos al día durante tres días consecutivos. La primera vez se matan las bacterias vegetativas; cualquier esporo que sobreviva germinará en el medio nutritivo durante la noche, dando lugar a formas vegetativas que serán muertas durante la segunda y tercera vaporizaciones.
FILTRACION
Las bacterias pueden eliminarse de los líquidos haciéndolos pasar a través de filtros con poros muy pequeños que impiden el paso de las bacterias pero, en general, no de los mycoplasmas ni virus. Se emplea este método parra esterilizar el suero para su uso en el laboratorio, las soluciones de antibióticos y los medios de cultivo especiales que se alteran por el calor. Se utiliza también para separar los productos solubles del crecimiento bacteriano (toxinas) de los medios de cultivo líquidos.
TIPOS DE FILTROS
Los siguientes tipos de filtros tienen un interés histórico principalmente:
Bujías de barro de loza tales como los tipos de Berkefeld y Mandier, que están hechas de Kieseighur y el filtro de Chamberland de porcelana no vidriada.
Filtros de asbesto (filtros Seitz).
Filtros de vidrio incrustado, que se construyen con vidrio finamente pulverizado, fundido lo suficiente para hacer que los gránulos de vidrio se adhieran entre si.
FILTROS DE MEMBRANA
Estos filtros se fabrican de ésteres de celulosa (acetato de celulosa, nitrato de celulosa, colodión, etc.). Tienen muchas ventajas sobre los primeros tipos de filtros bacteriológicos, ya que son mucho menos absorbentes y tienen una velocidad de filtración elevada. Se fabrican con una gran variedad de tamaño de poro y algunas membranas pueden emplearse para separar partículas de virus, mediante el uso de diferentes gradaciones de tamaño de poro. Los filtros bacterianos tienen un tamaño de poro menor de 0,75 umas. Las membranas pueden esterilizarse al autoclave.
DESINFECCION
Pueden utilizarse una gran variedad de sustancias químicas y todas ellas reciben el nombre común de desinfectantes o biocidas. El primero de estos términos es el que se va a usar en este libro. Algunos de ellos son reactivos ordinarios, otros son formulaciones especiales, registradas con nombres comerciales. Los microbiólogos y gerentes de laboratorio se ven con frecuencia presionados por los vendedores para que adquieran sus productos, para los que hacen extravagantes propagandas. Generalmente hay diferencias marcadas entre la actividad de algunos desinfectantes cuando se ensayan en condiciones óptimas por la técnica de Rideal-Walker u otras menos acreditadas y cuando se utilizan en la práctica. Los efectos del tiempo, temperatura, pH y la naturaleza química y física del artículo que se va a desinfectar y la materia orgánica presente, no son a menudo totalmente consideradas.
Bibliografia:
